EFEITO DO LASER DE BAIXA INTENSIDADE NA ATIVIDADE BIOLÓGICA DE CÉLULAS-TRONCO DA POLPA DE DENTES DECÍDUOS HUMANOS
Polpa dental, células-tronco, laser, cultivo celular, diferenciação celular.
O laser de baixa intensidade (LBI) tem sido utilizado para promover cicatrização e regeneração dos tecidos, porém pouco se sabe sobre a sua eficácia na proliferação e diferenciação de células-tronco de origem dental. O estudo tem como objetivo avaliar, através de experimentos in vitro e in vivo, a influência do LBI na atividade biológica de células-tronco da polpa de dentes humanos decíduos esfoliados (SHED). Serão obtidas polpas de seis dentes decíduos em estágio final de esfoliação e as SHED serão expandidas. No experimento in vitro, as células serão irradiadas com duas doses (0,5 e 1,0 J/cm2), com um grupo não irradiado como controle. Nos intervalos de 0, 24, 48 e 72 horas após a primeira irradiação, serão avaliados a proliferação celular pelos métodos de exclusão por azul de tripan e ensaio de MTT, e a viabilidade e o ciclo celular por citometria de fluxo. O efeito do LBI na diferenciação celular in vitro será avaliado através da identificação de nódulos mineralizados nas placas de cultivo, assim como pela expressão de fosfatase alcalina e osteocalcina através de citometria de fluxo. No ensaio experimental in vivo as SHEDs associadas a partículas cerâmicas de hidroxiapatita e fosfato tricálcico (HA/TCP) serão enxertadas no tecido subcutâneo do dorso de camundongos C57Bl/6. Os animais serão divididos em três grupos, sendo um controle e dois submetidos a laserterapia com doses de 0,5 e 1,0 J/cm2 em dias alternados, durante 15 dias. Após 4 semanas, as áreas dos transplantes serão submetidas a avaliação de parâmetros teciduais (infiltrado inflamatório, neoformação vascular, grau de colagenização e formação de tecido mineralizado) e análise da expressão de fosfatase alcalina e osteocalcina por Western blotting. Os dados quantitativos serão submetidos à análise estatística não paramétrica e os dados descritivos serão também utilizados para comparação entre os grupos.